Свиноматки, оплодотворенные искусственно зараженной спермой СЦВ2: II. Результаты после смерти

F. Morandi¹, B. Bacci¹, S. Panarese¹, D. Ferrara¹, L. Fusaro¹, M.L. Bacci¹, M. Dottori², P. Bonilauri ², G. Leotti³, T. Vila⁴, F. Joisel⁴, F. Ostanello¹, G. Sarli¹

¹ School of Veterinary Medicine, University of Bologna, Italy; ² IZSLER, Reggio Emilia, Italy;

³ Merial, Milano, Italy, ⁴ Merial S.A.S., Lyon, France

Введение

Экспериментальное заражение, используя несколько путей введения вируса беременным животным при родах (1, 2, 3, 4), показывает влияние СЦВ2 на репродуктивные патологии. Известно, что внутриутробная смерть плода приводит к появлению мертвых или мумифицированных поросят, может быть определено заражение СЦВ2 в тканях (1, 3, 5). В репродуктивных патологиях, которые связанны с СЦВ2, присутствие утробных или плацентарных поражений недостаточно документировано. Мы разработали экспериментальную модель заражения СЦВ2 путем искусственного осеменения свиноматок, зараженной СЦВ2 спермой; в этом документе мы представляем и обсуждаем распространение СЦВ2 в тканях, и связанные с этим поражения, свиноматок и плодов, путем сбора образцов после смерти.

Материалы и методы

Экспериментальная разработка и результаты исследований на животных представлены по контексту (6). Вскрытия проводились на всех не супоросных и (количество = 3) и супоросных (количество = 6) животных. Некоторые ткани свиноматки и каждого плода (сердце, легкие, печень, плацента и амниотическая жидкость) были собраны (Таблица 1) для проведения PCR в реальном времени, гистологии и иммуногистохимии (ИГХ). Также собирали соответствующие фаллопиевы трубы и плаценту вместе с образцами плодов. Анализы PCR в реальном времени проводились в соответствие с методом Olvera et al. (7). Образцы для гистологии были окрашены гематоксилином и эозином (Г-Э). ИГХ была проведена, используя 1/100 PBS-растворенные антитела СЦВ2 (Mab F217, by Dr. G. Allan (Belfast, UK)), как описывалось ранее (8), но с использованием стрептавидин-биотин-пероксидаз полимерного комплекса (SuperPicture kit peroxidise, Zymed^® Lab).

Результаты

У свиноматок при вскрытии единственно зафиксированные поражения включали в себя от легкого до умеренного хронического волокнистого плеврита и/или перикардита. У одного животного была обнаружена энзоотическая пневмония. В одном случае наблюдался легкий серо-фибринозный перитонит, в двух случаях – пятнистая печень. У двух из 3 не супоросных свиноматок обнаружили гиперемию и отек слизистой оболочки матки. Трое из 6 зараженных свиноматок были, беременные и имели 16, 11 и 7 плодов соответственно, тогда как двое из 3 контрольных – 11 и 8. У одной контрольной свиноматки случился выкидыш, но ДНК СЦВ2 не было обнаружено ни у одного из 3 абортивных плодов. Только в одной плаценте (позитивной на ДНК СЦВ2 в меру высокой вирусной загрузкой, >10⁸ геномных копий/мл) легкий фокальный некроз хориального эпителия дал позитивный результат на ИГХ по антигенам СЦВ2, локализованных в цитоплазме клеток. Плоды также дали позитивный результат на ИГХ в цитоплазме гепатоцитов.

Таблица 1: RT-PCR результаты образцов ткани

* 3 абортивных плода до вскрытия

Обсуждение

Настоящее исследование предлагает защитную роль анти-СЦВ2 антител в профилактике заражения плода даже в случае внутриутробного заражения. Свиноматка № 25, с самыми низкими титрами анти-CЦВ2 (начало эксперимента) (6) и виремией в двух последующих сборах образцов, также имела наибольшее количество позитивных плодов и сходство с соответствующими позитивными маточными трубами. Более того, результаты демонстрировали, что СЦВ2 реплицируется в хориальном эпителии, где он, возможно, причинял некроз. Также как и вирусная загрузка в тканях плода, также поражения плаценты могут считаться причиной смерти плода. Это исследование показывает, что не все плоды позитивны на СЦВ2, рекомендуется отправлять весь помет в лабораторию для правильной диагностики репродуктивных нарушений, связанных со СЦВ2.

Ссылки

1. Johnson C, et al., 1999. J Vet Diagn Invest 14:507-12
2. Cariolet R, et al., 2001. Proc. ssDNA viruses of plants, birds, pigs and primates, 128
3. Park JS, 2005, J Comp Pathol. 132:139-44
4. Rose N, et al., 2007. J Comp Pathol 136:133-44
5. West H, et al., 1999. J Vet Diagn Invest 11:530-32
6. Sarli G, et al., 2010. Proc 21^st IPVS
7. Olvera A, et al., 2004. J Virol Methods 117:75-80
8. Sarli G, et al., 2009. Vet Rec 164:519-23